الطرق الرئيسية لاختبار RCR

ما هو اختبار RCR ؟

يشير اختبار RCR إلى سلسلة من الأساليب المستخدمة أثناء إعداد منتجات العلاج الخلوي للكشف عن وجود فيروس Retrovirus (RCR) المختص بالتكاثر أو فيروس Lentivirus المختص (RCL). بما أن هذه الفيروسات ذات الكفاءة في النسخ المتماثل (RCV) يمكن أن تنشأ من خلال طفرات عكوسة للناقلات الفيروسية وتمتلك قدرات النسخ المتماثل ، فمن المحتمل أن تشكل خطرًا على سلامة المرضى. الغرض مناختبار RCRهو ضمان سلامة المنتجات ومنع تلوث RCV.

الطرق الرئيسية لاختبار RCR

مؤشر طريقة زراعة الخلايا

تتضمن هذه الطريقة زراعة العينة المشتركة مع خلايا المؤشر ومراقبة التأثيرات الخلوية (CPE) أو علامات التكاثر الفيروسي. يمكن لهذه الطريقة اكتشاف وجود RCR بصريًا ولكنها تستغرق وقتًا طويلاً.

طريقة إليسا (فحص بروتين p24)

تحدد هذه الطريقة وجود تلوث RCR عن طريق الكشف عن وجود البروتين الفيروسي الأساسي p24. بروتين p24 هو بروتين أساسي من الفيروسات القهقرية والفيروسات ، ويشير وجوده بشكل عام إلى وجود جزيئات الفيروس.

طريقة PCR/qPCR

تستخدم هذه الطريقة بدايات محددة لتضخيم مناطق معينة في الجينوم الفيروسي (مثل psi-gag أو الجينات) باستخدام تفاعل سلسلة البوليميراز (PCR) أو PCR الكمي (qPCR) تقنية للكشف عن وجود RCR. نظرًا لوقت اكتشافها القصير وحساسيتها العالية وقابليتها للتكرار القوي ، تُستخدم طريقة qPCR على نطاق واسع لاختبار الإطلاق السريع للمنتجات.

مقايسة نشاط النسخ العكسي (PERT)

تحدد هذه الطريقة وجود RCR عن طريق الكشف عن نشاط النسخ العكسي. الترانسكريبتاز العكسي هو إنزيم أساسي لتكرار الفيروسات القهقرية وفيروسات العدس ، ويمكن أن يكون نشاطه بمثابة علامة للتكاثر الفيروسي.

من بين هذه الطرق ، تفضل العديد من شركات التطبيقات طريقة qPCR بسبب كفاءتها وحساسيتها. باستخدام طريقة qPCR ، يمكن الحصول على نتائج اختبار RCR في وقت قصير نسبيًا ، مما يضمن سلامة وجودة المنتجات.

بشكل عام ، يعد اختبار RCR جزءًا لا غنى عنه من عملية الإنتاج لمنتجات العلاج الخلوي ، بهدف ضمان عدم احتواء المنتج على فيروسات قادرة على النسخ المتماثل ، مما يقلل من خطر الأورام الثانوية وغيرها من قضايا السلامة المحتملة للمرضى الذين يتلقون العلاج.