مقدمة لطرق الفحص لخلايا الحمض النووي المضيفة المتبقية في المنتجات البيولوجية

الخلايا المضيفة هي حجر الزاوية للمنتجات البيولوجية ، وأصبحت الخطوط الخلوية للثدييات الآن المضيفات الأكثر استخدامًا على نطاق واسع للتعبير عن المنتجات البيولوجية وإعدادها. تشمل الخلايا المضيفة الشائعة خلايا مبيض الهامستر الصيني (CHO) ، وخلايا فيرو من كلى القرد الأخضر الأفريقي ، وخلايا الكلى الجنينية البشرية (HEK).

خطر الحمض النووي للخلية المضيفة المتبقية

السرطنة

آلية مسرطنة الأولية منخلية مضيف متبقية دناهو إدخال الجينات المسرطنة السائدة ، مثل MYC و RAS. هذه الجينات المسرطنة السائدة يمكن أن تحول الخلايا الطبيعية مباشرة ، مما تسبب في بعض الخلايا الطبيعية لتتمايز إلى خلايا الورم. طفرات إدخال الحمض النووي للخلية المضيفة المتبقية هي أيضا عوامل مسرطنة محتملة.

العدوى

قد يحتوي الحمض النووي للخلية المضيفة المتبقية على جينومات فيروسية معدية ، والتي يمكن أن تنتج جسيمات فيروسية معدية من خلال تضخيم النسخ والتكرار. لذلك ، قد يكون خطر العدوى من الحمض النووي للخلية المضيفة المتبقية أعلى من خطر الإصابة بالسرطان.

المناعة

لأن الحمض النووي الجينومي من مصادر ميكروبية غني بمتواليات CpG وغير ميثليته ، فإنه يزيد من خطر المناعة لعقاقير البروتين المؤتلف في الجسم الحي. على سبيل المثال ، تسلسلات CpG الغنية بالبكتيريا قد تؤدي إلى استجابات مناعية بوساطة TLR (مستقبلات تشبه الرسوم).

طرق الكشف عن الحمض النووي للخلية المضيفة المتبقية

DNA التحقيق التهجين

في هذه الطريقة ، يتم تشويها الحمض النووي الخارجي في عينة الاختبار إلى خيوط واحدة ويتم كثفها على غشاء المرحلة الصلبة. في ظل ظروف معينة ، يمكن إعادة التهجين مع مسابير الحمض النووي التكميلية أحادية الجديلة التي تحمل علامات لتشكيل الحمض النووي المزدوج الجديلة. ومع ذلك ، فإن نتائج الكشف عن طريقة التهجين لها اختلافات كبيرة مع محتوى الحمض النووي المتبقي الفعلي للخلية المضيفة ، والطريقة غير مستقرة مع أوقات كشف طويلة نسبيًا.

تلطيخ الفلورسنت

تستخدم هذه الطريقة أصباغ الفلورسنت DNA ثنائية الشق ترتبط تحديدًا بحنا ثنائي الشق لتشكيل المجمعات ، مما ينتج إشارة فلورية قوية عند الإثارة عند طول موجي بنانومتر. تم الكشف عن إشارة الفلورسنت عند ، nm باستخدام مقياس فلورومتر. كثافة الفلورسنت تتناسب مع تركيز الحمض النووي. ومع ذلك ، فإن إشارة الفلورسنت لهذه الطريقة تتداخل بسهولة ولها خصوصية ضعيفة ، مما يتطلب تجنب تلوث الحمض النووي البيئي ، ويجب أن تكون جميع المواد والكواشف المستخدمة خالية من الحمض النووي.

كمية بكور

حاليًا ، الطريقة الأكثر تقليدية للكشف عن الحمض النووي للخلية المضيفة (HCD) ، تتضمن هذه التقنية مراقبة في الوقت الفعلي لعملية البكر من خلال إشارات الفلورسنت لتحليل القالب كميًا. بناءً على المبادئ الكيميائية ، يمكن تقسيمها إلى نوعين: طريقة التحقيق TaqMan وطريقة الصبغ SYBR.

تستخدم طريقة مسبار TaqMan مجسات أوليجونوكليوتيد خاصة بالجينات موسومة بالأصباغ الفلورية خلال تفاعل البكر للكشف عن المنتج ، في حين أن طريقة صبغة SYBR تضيف زيادة في صبغة الفلورسنت إلى نظام تفاعل البكر. يدمج الصبغة على وجه التحديد في حبلا الحمض النووي المزدوج ويبعث إشارة الفلورسنت. تزيد طريقة مسبار التيقمان من الخصوصية من خلال خطوة التعرف على المسبار ، في حين أن طريقة صبغة SYBR أبسط وأكثر وضوحًا.