تحديد بروتين خلية المضيف المتبقية والكمية

يتم التعبير عن البروتينات المؤتلفة في المقام الأول في الخلايا المضيفة ، مثل البكتيريا أو الخميرة أو الثدييات أو الحشرات أو خطوط الخلايا النباتية. أثناء عملية الإنتاج الحيوي ، تنتج هذه الخلايا المضيفة أيضًا بروتينات ثانوية ضرورية للوظائف الخلوية الطبيعية. عندما تخضع الخلايا لموت الخلايا المبرمج والموت والتحلل ، يتم إطلاق هذه البروتينات الثانوية في وسط زراعة الخلايا. وبالتالي ،بروتين خلية المضيف المتبقيتصبح شوائب حرجة متعلقة بالعملية يمكن أن تؤثر على السلامة والفعالية السريرية. تنص صيدلية الولايات المتحدة على أن مستويات بقايا HCP يجب أن تتراوح بين 1-، eg/mg.

مقايسات إليسا هي طريقة دوائية لقياس كمية HCP ، على الرغم من بعض القيود. على سبيل المثال ، تغطية الأجسام المضادة في مجموعات إليسا هي فقط من من من من من من من من من نوع HCP ، مما يعني أنها لا يمكن أن تغطي جميع أنواع HCP. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن أن تقيس إليسا فقط المبلغ الإجمالي لـ HCP ولا يمكنها تقديم معلومات عن أنواع وكميات HCPs الفردية. لذلك ، يوصي خبراء الصناعة باستخدام مطياف الكتلة لتحديد دقيق وتحليل كمي لـ HCPs كطريقة متعامدة.

تطبيق مطياف الكتلة في تحليل بروتين الخلية المضيفة المتبقية

1. تحسين العمليات الحيوية

يتم إجراء دراسات مقارنة لعينات أثناء العملية من طرق مختلفة لتحليل الكفاءة التدريجية لإزالة HCP ، وبالتالي تحديد المسار الأمثل. منذ إليسا يمكن الكشف عن مجموع محتوى HCP فقط ، بعض HCPs مع محتوى عال ولكن المناعة منخفضة (غير معترف بها من قبل الأجسام المضادة) لا يمكن رصدها بشكل فعال. لذلك ، يوصى باستخدام بيانات مطياف الكتلة أثناء تطوير العملية لرصد أكثر دقة.

2. تحليل HCP في المنتجات النهائية

يتم إجراء تحليل مقارن للمواد الدوائية من دفعات مختلفة لتقييم استقرار المعالجة الحيوية. هذا التحليل ، جنبا إلى جنب مع بيانات إليسا ، تقييم مزيد من الشوائب المتبقية HCP ويقلل من المخاطر السريرية.