الكشف عن العوامل المغرضة في المنتجات البيولوجية

تشمل ملوثات العوامل العَرضية في مخزون البذور وركائز الخلايا والمواد الخام المستخدمة في إنتاج المنتجات البيولوجية البكتيريا والفطريات والميكوبلازما والمكوباكتيريا والفيروسات. يتم تحقيق الإزالة أو التحكم الفعال في هذه العوامل من خلال تقنيات غير محددة ومحددة.

• توفر الطرق غير المحددة عمومًا نطاقًا واسعًا للكشف ولكن في بعض الأحيان يكون لها قيود في الحساسية ومشكلات الكشف المحتملة المتعلقة بالمضيف ، مثل اختبارات الحيوانات والثقافة.

• أساليب محددة تستهدف مسببات أمراض محددة ، مثل PCR للتسلسلات الجينية. في حين أن بكر لديه حساسية عالية ، الحد منه هو عدم القدرة على تصميم الاشعال لتسلسلات غير معروفة.

لضمان أقصى قدر من السلامة البيولوجية ، من الضروري اتباع نهج شامل يتضمن تحديد المصادر المناسبة ومراقبة الجودة للمواد الخام ومواد البدء ، والالتزام بممارسات التصنيع الجيدة (GMP) المبادئ (بما في ذلك مراقبة البيئة والموظفين والتحقق من صحة العملية) ، والاختبار الدقيق للتحقق. تستخدم الطرق التالية بشكل عام للكشف عن العوامل المغرضة:

1. في الاختبارات الحية:

1) استخدام بيض الدجاج أو الحيوانات الجنينية للاختبار.

2. الاختبارات في المختبر:

1) طريقة الثقافة:

• باستخدام وسائط مختلفة أو أجار.

2) طرق بكر:

• للكشف عن الفيروسات الخاصة بالأنواع.

3) الطرق الكيميائية الحيوية:

• مقايسات مثل PERT لـ transcriptase العكسي.

4) تسلسل الجين:

• لتسلسل الجينات الفيروسية أو البكتيريا غير المحددة.

5) اختبارات العدوى:

• مؤشر المقايسات الخلوية لأنواع مختلفة من الفيروسات المختصة النسخ المتماثل.

6) المجهر الإلكتروني لنقل البيانات (تيم):

• للمراقبة المورفولوجية.

تختلف طرق الكشف عن العوامل العَرضية باختلاف مرحلة المعالجة الحيوية ونوع العينة والكائنات الدقيقة المستهدفة. يضمن استخدام الأدوات والكواشف المناسبة الكشف الموثوق والحساس ، حتى عند مستويات التلوث المنخفضة. لا توجد طريقة عالمية للكشف عن العوامل المغرضة ، ولكن اختيار التقنيات الصحيحة من القائمة أدناه يمكن أن يساعدك في العثور على أنسب الطرق لاحتياجاتك.

1. الكشف الجينومي:

• استخدام تسلسل عالي الإنتاجية لترتيب الحمض النووي بشكل شامل في المنتجات البيولوجية ومقارنته بقواعد البيانات لتحديد مسببات الأمراض المحتملة أو غيرها من الحمض النووي الخارجي.

2. الكشف عن البروتين:

• استخدام مطياف الكتلة لتحليل البروتينات في المنتجات البيولوجية وتحديد البروتينات الخارجية المحتملة.

3. الكشف المناعي:

• استخدام مقايسات الأجسام المضادة أو الاستجابة المناعية للكشف عن مكونات معينة في المنتجات البيولوجية, تحديد البكتيريا الخارجية المحتملة, الفيروسات, أو غيرها من المواد الضارة.

4. كشف الميكروبيولوجيا:

• استخدام أساليب الاستنبات لعزل الكائنات الدقيقة وتحديدها والكشف عن مسببات الأمراض المحتملة.

5. الكشف الجزيئي:

• باستخدام جهاز الكشف عن الهوائيات في المنتجات البيولوجية وتحديد الكائنات الحية الدقيقة الخارجية المستهدفة.

الطريقة القائمة على الكلور هي التقنية الجزيئية الأكثر شيوعًا للكشف الحساس والسريع عن التلوث الميكروبي أو قياسه. من خلال استهداف تسلسلات الحمض النووي المحددة ، فإنه يتيح اكتشاف بعض الأنواع المحددة ، التي يصعب زراعتها في المختبر أو تتطلب فترة زراعة طويلة ، على سبيل المثال ، يعد الكشف عن أنواع الميكوبلازما بواسطة qPCR ضروريًا لاختبار QC السريع لدعم تصنيع العلاج بالخلايا والجينات.

10 قطعة تضخيم ميكوبلازما qPCR